抗體的保存

抗體保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當，大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。本指南以abcam抗體保存方法為主，同樣也可以應用到其他絕大部分公司的抗體產品！請謹記！無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體！1. 收到抗體后請務必在12000rpm離心20-30s后再打開管蓋進行分裝和保存！Abcam的抗體使用非常特殊的儲存管，只有在12000rpm離心20-30s才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下來。即使是在10000rpm離心也會導致離心不完全，導致出現抗體的量不足的現象！2. 對于abcam大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20oC or -80oC 。對絕大多數抗體來說，保存在-20oC是完全足夠了。沒有任何證據顯示保存在-80oC 會有更多的好處！ 分裝可以*大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 分裝的量以一次實驗用完為好，*少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響 復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4oC，避免再凍起來！ 抗體工作液應該當天配制當天用完，在4oC 盡量不要超過1天。 **避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上 3. 大部分抗體收到后4oC短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。如果抗體很快（1-2周）會使用，推薦在4oC保存，這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則*好是在-20oC or -80oC。*關鍵的一點是要根據說明書推薦的方式來正確的保存抗體！但是，腹水形式的產品請在收到后立即凍起來！因為該類產品含有大量的蛋白酶，長期在4oC保存會導致抗體的降解！4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1-2周的時間，所以是在4oC的條件下來完成的。 4oC運輸*主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。所以運輸過程中**避免干冰運輸！特殊抗體的保存條件： 酶聯抗體：永遠保存在4oC，避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失 偶聯抗體：所有偶聯抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對光極為敏感，因此在所有的實驗階段也是要避光操作的！ IgG3的同型對照：永遠保存在4oC，避免凍起來。因為如果出現凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體 無論是保存還是運輸，**避免反復凍融！ 反復凍融會導致抗體變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結合能力！抗體保存其它相關信息： 關于加入甘油保存： 有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復凍融，甘油在-20oC 會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。但是abcam僅對非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩定性；而abcam只對按照推薦條件保存的抗體提供質量保證！加入甘油的溶液不建議在-80oC保存，因為這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話，請謹慎注意無菌操作，避免污染！關于蛋白保護劑： 蛋白在高濃度時更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入BSA之類作為穩定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話，則不能加入蛋白穩定劑，因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。關于疊氮化鈉（sodium azide）的使用： 為了防止微生物污染，疊氮化鈉經常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）。Abcam的很多抗體已經含有了0.02％-0.05%的疊氮化鈉，在說明書的“Storage buffer”中有標明的。在下述情況中不能使用疊氮化鈉：如果抗體用于染色或處理活細胞，用于體內研究： 疊氮化鈉在抵抗微生物的同時，對其它大部分有機物也是有毒的，因為它阻斷了線粒體的cytochrome electron transport system.要偶聯帶有氨基基團的抗體： 疊氮化鈉會干擾任何含有氨基基團的偶聯，因此在進行偶聯之前，應將疊氮化鈉去除。偶聯后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯的抗體，thimerosal (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護劑！注：疊氮化鈉的去除方式： 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 疊氮化鈉的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。

*好用相應的稀釋液稀釋，里面的保護蛋白和防腐劑會使保存效果好一些，另外*好不要凍融，不小心凍上問題也不大，用酶標稀釋液稀釋的酶或用小牛血清＋防腐劑稀釋的抗血清4°保存半年沒有問題。